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原代細胞轉染的實驗操作要注意的事項
2022-09-06 原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉...
選擇真核細胞轉染試劑要考慮哪些因素
2022-08-30 轉染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導入細胞的過程。采用各種化學、生物學或物理方法導入外源性核酸會改變細胞的特性,從而實現(xiàn)細胞基因功能和蛋白質表達研究。轉染后,導入的核酸可以瞬時性地存在于細胞內,只表達一段時間且不會復制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內,隨著宿主基因組的復制而復制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術語與該領域的技術進展步調一致,并進一步區(qū)分不同的方法和細胞類型。轉染技術作為一種分析工具，可將外源基因導入真核細胞，有助于機體表征遺傳、蛋白質合成、細...
影響細胞轉染效率的因素有哪些？
2022-08-19 細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產(chǎn)等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。影響細胞轉染效率的因素有哪些？1.轉染試劑的選擇不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選...
核酸純化的方法及原理
2022-08-19 核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎，核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的最重要因素，也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提...
化學發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng)
2022-07-22 在常溫下由化學反應產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導至的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W發(fā)光是一個多步驟的過程。學發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學發(fā)光技術與高特異性的免疫反應結合起來建立的微量測定技術，因此該技術靈敏度高、線性范圍寬、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...
PCR原理及反應步驟
2022-07-21 PCR的原理：多聚酶鏈式反應(polymerasechainreaction)簡稱PCR技術，是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術，可在數(shù)小時之內對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應完成DNA擴增的過程。PCR技術的特異性取決于引物和模板DNA結合的特異性。PCR反應分為三步：1)變性：通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，...
影響重組腸激酶活性的因素有哪些
2022-07-20 腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動物十二指腸內的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達的融合蛋白（識別位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結構亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構成，二者以二硫鍵結合。據(jù)報道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時對基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強。天然腸激酶來源有限，且從動物組織提...
一圖讀懂細胞轉染那些事-part1
2022-06-30 簡析各類細胞轉染方法細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。定義隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個維度，介紹細胞轉染的各類小知識。一、瞬時轉染與穩(wěn)定轉染哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內表達的蛋?正確折疊并進行復雜修飾，表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài)，便于模擬真實細胞內環(huán)境，進行蛋白功能研究。把目的基因轉入哺乳動物細胞，表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時轉染與穩(wěn)定轉染（構建穩(wěn)定細胞系），如圖...

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