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  • 慢病毒的感染效率受哪些因素影響？

    2023-01-06 慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長達數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所...

  • 細胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種技術

    2022-12-31 細胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫...

  • 溶酶體是細胞內(nèi)的消化器官

    2022-12-21 溶酶體（Lysosomes）是動物細胞中重要的細胞器,其存在的完整性與動物生理病理均密切相關。溶酶體是真核細胞中為單層膜所包圍的細胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，內(nèi)部pH4～5，含豐富的水解酶，具有細胞內(nèi)的消化功能。新形成的初級溶酶體經(jīng)過與多種其他結(jié)構(gòu)反復融合，形成具有多種形態(tài)的有膜小泡，并對包裹在其中的分子進行消化。因此，溶酶體具有溶解或消化的功能，為細胞內(nèi)的消化器官。溶酶體染色試劑盒可以標記活細胞中的溶酶體，使之帶綠色熒光(Ex/Em=405/505nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，...

  • RNA的提取方法總結(jié)

    2022-12-09 這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細胞質(zhì)和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細...

  • 微生物的培養(yǎng)方法步驟介紹

    2022-11-29 微生物培養(yǎng)所培養(yǎng)的微生物通常是病菌、細菌、放線菌、真菌等，屬于生物培養(yǎng)的一種。微生物培養(yǎng)步驟：1.配置不同濃度的營養(yǎng)液稀釋液:取營養(yǎng)液1ml溶于9ml無菌水中,振蕩5min配成10%的溶液.2.將容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無菌水的試管中.以此類推制成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.3.將試管口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養(yǎng)皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養(yǎng)皿中,在各培養(yǎng)皿上標...

  • 蛋白酶K的性質(zhì)從這三個方面介紹

    2022-11-27 蛋白酶K來源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber），是一種與枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶。由于它能降解角蛋白（keratin），因此被命名為蛋白酶K。它是一種高活性的廣譜蛋白酶，在變性劑尿素或十二烷基磺酸鈉（sodiumdodecylsulfonate，SDS）溶液中依然能保持較高酶活力，所以被廣泛應用于各種生物材料中的DNA或RNA的提取。蛋白酶K的性質(zhì)從這三個方面介紹：一、分子結(jié)構(gòu)蛋白酶K由一條肽鏈組成，包含277個氨基酸殘基，相對分子質(zhì)...

  • 高保真DNA聚合酶的定義及如何選擇

    2022-11-08 DNA聚合酶是PCR反應中*組成部分，是參與DNA復制中的重要酶，被用在生物及醫(yī)學等領域的各個研究方向上。PCR技術發(fā)明至今40多年的時間里，從早期被發(fā)現(xiàn)的TaqDNA聚合酶到現(xiàn)在，酶越來越多樣化。隨著新酶的發(fā)現(xiàn)和對舊酶的改造，DNA聚合酶的保真性、特異性、靈敏度等都獲得了明顯的改進。而高保真DNA聚合酶的出現(xiàn)正是順應了市場需求，下面小編將圍繞高保真DNA聚合酶的作用原理和應用方向等進行介紹。一、什么是什么是高保真酶高保真DNA聚合酶有聚合中心和酶切中心，聚合中心具有5'→3...
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